更轻松的液相方法开发（五）利用质谱信息自动识别共流出峰
在液相色谱方法开发过程中，不同分析条件会导致化合物保留时间偏移，出峰顺序交换，或共流出等现象出现，因此在不同色谱图之间进行准确的峰跟踪非常具有挑战性。通常二极管阵列检测器(PDA)可以利用化合物紫外光谱的差异来跟踪峰，进一步地，使用质谱检测器有望基于m/z信息提高峰跟踪的准确性，并自动识别共流出峰。
本文将介绍如何利用LCMS-2050质谱检测器和LabSolutions MD方法开发软件进行准确的峰跟踪和共流出峰自动检测，从而提高方法开发的效率的应用案例。
样品信息
六种小分子化合物:奎尼丁、利多卡因、甲氧氯普胺、罂粟碱、地布卡因、阿米替林
解决方案
超高效液相色谱方法开发系统
单四级杆质谱检测器LCMS-2050
LabSolutions MD方法开发软件
Shim-packScepterC18-120色谱柱
分析条件
以0.15%甲酸水溶液作为水相，以乙腈/甲醇的混合溶剂作为有机相，进行梯度洗脱。通过改变有机流动相的组成比例和柱温箱温度，对每一个化合物的分离度进行了全面研究。具体优化项为:有机流动相中的乙腈比例以10%的增量从0%变化到100%(11种)，柱温箱温度以5°℃的增量从30℃C变化到40℃C(3种)。
自动识别和标记共流出峰
使用LCMS-2050质谱信息追踪时，LabSolutions MD可以轻松发现未分离的峰提供更有效的帮助来筛查理想的分离条件，这要归功于基于m/z信息的精确峰跟踪，以及共流出峰的自动确定和突出显示。
①奎尼丁 ②奎尼丁杂质 ③利多卡因 ④甲氧氯普胺 ⑤罂粟碱 ⑥地布卡因 ⑦阿米替林图1 基于m/z信息的峰跟踪右上角为乙腈/甲醇比例，柱温为30°C如图1，化合物的保留时间随着有机相中的乙腈比例改变而变化，包含奎尼丁杂质在内的最多7种化合物被分离。值得注意的是，在60%乙腈的色谱图中(图1红色框出)只检测到5个峰，⑥/⑦被共洗脱，这些未分两种杂质组合②/③、离的峰很容易被忽视，LabSolutions MD以“橙色”突出标记共流出峰(图 1黑色圆圈)它还为共流出化合物分别提供 m/z，轻松了解是哪些化合物未分离。
通过设计空间可视化分离度
图2 每种化合物的分离度设计空间*MODR是黑色阴影区域(左上角);A点为推荐最佳分离条件通过设计空间对分离度的可视化，可以轻松快速地识别符合目标的 MODR和理想参数条件。本例中为每一个化合物的分离度设定目标如表2所示，同时满足所有分离目标的区域是方法的可操作设计空间(MODR)，在图2中显示为黑色阴影区域。
纵轴表示有机流动相中的乙腈比例，横轴表示柱温箱温度。具有较高乙腈比例和较低柱温箱温度(图3中的A点)的条件有望提供最佳分离效果。
图3 A点(最佳分离条件)的实测色谱图(*为分离度)
总结
利用LCMS-2050的m/z信息进行精确的峰跟踪，并自动标识共流出峰。
◎ 可视化的设计空间有助于轻松识别符合多种化合物分离度目标的MODR。
这允许在不依赖用户经验的情况下了解各种参数和分离度之间的关系，从而进行更有效的参数优化。
注:文中涉及最佳、最高、最大类描述，限于实验组别对比结果